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Galéh.
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Professor Layton: Archeologo stimato, noto e abilissimo nella risoluzione di casi e misteri che gli vengono posti. Uomo dallo stile inappuntabile e di calma serafica affronta i problemi con un prontezza di spirito e lucidità fuori dal comune. Caratteristica identificante è il suo cilindro, calzato in ogni occasione. La sua frase tipica è: “Tutti gli enigmi hanno una risposta”.
Luke Triton: L'apprendista di Layton ed è in grado di risolvere gli enigmi che manderebbero in difficoltà qualsiasi adulto. È intenzionato a ripercorrere i passi di Layton. Con gli animali ha un rapporto particolare, che è stato la salvezza di più di un'indagine. Ha un appetito leggendario.
Luke del futuro: Luke dieci anni nel futuro, accompagnerà per la durata del viaggio Layton e Luke. La sua storia viene svelata durante il gioco. Verso la fine del gioco si rivela un ragazzo di nome Clive che ha usato Dimitri Allen per progettare una macchina dalle dimensioni mastodontiche per distruggere la città di Londra come vendetta contro gli scienziati che hanno ucciso involontariamente i suoi genitori 10 anni prima. Uno degli scienziati, nonché il principale responsabile della morte dei suoi genitori e di Claire, fidanzata del Professor Layton, è il primo ministro Bill Hawks, al quale tuttavia non viene data nessuna pena.
Don Pablo: Don Pablo è la nemesi di Layton. Nel corso del gioco vengono svelati i motivi per il suo odio verso il professore: erano entrambi innamorati di Claire, che alla fine scelse Layton. Tuttavia decide di collaborare con questi per salvare la città dalla follia di Clive. Esperto in meccanica, ha costruito una macchina volante che ha permesso a Celeste (Claire) di raggiungere la fortezza movente e ha aggiunto un sistema alla macchina di Layton permettendole di fungere come un aereo.
Ispettore Chelmey: È il burbero poliziotto che appare per la prima volta nel Paese dei Misteri come travestimento di Don Pablo e in seguito nello Scrigno di Pandora come ispettore a cui è affidato il caso. Accompagnerà Layton nella ricerca del Primo Ministro.
Dimitri Allen: È il creatore della macchina del tempo, secondo il volere del primo ministro Bill Hawks. Nel gioco si scopre a poco a poco, che la sua gioventù è strettamente collegata a quella di Layton. Anche lui desidera vendicarsi contro il primo ministro per la morte di Claire. La macchina del tempo, creata da lui, è solo una messinscena per pianificare la sua vendetta. Tuttavia la prima vera macchina che ha costruito (fatta testare su Claire da Bill Hawks) ha ottenuto "una specie" di successo, catapultando la ragazza nel futuro. Tuttavia la macchina era piuttosto rudimentale e le molecole di Claire tendevano a ritornare nel passato o nel futuro. Tutti gli sforzi di Dimitri per stabilizzare gli atomi sono stati vani.
Flora Reinhold: È la figlia del barone Reinhold e di Lady Viola. Da quando Layton ha risolto l'enigma della Mela d'Oro ritrovandola in cima alla torre di Saint-Mystère, affianca Luke e Layton nelle loro avventure. In questo gioco ha un carattere più secondario, entrando in scena dopo la metà.
Connestabile Barton: È l'assistente dell'ispettore Chelmey e lo segue per quasi tutta l'avventura.
Bill Hawks: Il primo ministro d'Inghilterra è la prima persona ad usare la macchina del tempo sviluppata dal dr. Stahngun. La macchina esplode sia Hawks che Dimitri scompaiono. È oggetto dell'odio di Dimitri per il fatto che ha testato un rudimento di macchina del tempo su Claire quando questo presentava ancora delle falle. Il tutto per manie di grandezza.
Crystal e Quartz: Marito e moglie, sono proprietari di un negozio di orologi. Vanno ricordati perché questo negozio è quello che catapulta Luke e Layton nella Londra futura.
Claire: Ragazza del Professor Layton. La sua storia viene raccontata a spezzoni attraverso flashback nel corso del gioco. Creduta morta durante un incidente in laboratorio, si scopre che in realtà la macchina del tempo aveva funzionato, catapultandola nel presente. Compare alla fine col nome inventato di Celeste per aiutare Layton e i suoi alleati a compiere la missione. Alla fine del gioco, essendo le sue cellule instabili, ritorna nel passato (al momento dell'incidente in cui perse la vita), causando molto dispiacere a Layton, il quale, per la prima volta nel corso dei giochi e, soprattutto, di tutta la serie, si toglie il cilindro e lascia vedere i suoi capelli.
FOnte: http://it.wikipedia.org/wiki/Il_professor_..._futuro_perduto.